142457 Спосіб визначення муропептидів у складі бактеріальних гідролізатів

Abstract

1. Спосіб визначення муропептидів, відповідно до якого, до гідролізату бактеріальних клітин з вмістом сухих речовин 1-20 % додають 1-100 мл розчину трихлороцтової кислоти концентрацією 5-25 %, залишають на 5-40 хв, центрифугують протягом 5-30 хв при 3-15 хв-1, проводять декантацію, до надосадової рідини додають натрій гідроксид концентрацією 5-25 % до нейтральної реакції, розчинну фракцію гідролізату піддають іонообмінній хроматографії з використанням катіоніту КУ-2, для чого 10-100 мл нейтралізованої надосадової рідини автолізату пропускають через колонку зі швидкістю 1-5 мл/хв, далі колонку промивають 40-200 мл дистильованої води та проводять елюювання адсорбованих катіонів амінокислот, пептидів та муропептидів, пропускаючи через колонку 10-100 мл 6н NH4OH зі швидкістю 1-5 мл/хв, потім колонку промивають 40-500 мл води, елюент відбирають об'ємом 20-100 мл, визначають наявність білкових сполук у фракціях якісною реакцією з розчином нінгідрину, для чого відбирають 2 мл елюенту із кожної фракції та додають 1 %-вий розчин нінгідрину, суміш витримують на киплячій водяній бані протягом 10-30 хв, фракції елюенту з вмістом білкових речовин об'єднують та концентрують на водяній бані до вмісту сухих речовин 0,2-10 %, потім додають 10-100 мл води і знову випарюють для видалення слідів аміаку, елюент піддають сублімаційному сушінню до вмісту сухих речовин 8-12 %, готують 0,01-2 %-ві розчини отриманого препарату, відбирають 0,5-5 мл та додають реактив Антрона, суміш витримують на киплячій водяній бані протягом 10-30 хв та вимірюють оптичну густину на колориметрі при 625 нм у кюветі 10 мм відносно розчину порівняння, а вміст муропептидів знаходять за калібрувальним графіком, який будують, використовуючи стандартний розчин глюказаманілмурамілдипептиду у межах концентрацій 0,01-0,05 мг/мл.

2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що використовують гідролізат бактеріальних клітин об'ємом 1-100 мл.